Quantitative Analysis of RNA

analysis of rna

Aim: 

To determine the amount and concentration of RNA sample isolated  from bacterial cells

Ligation of DNA fragments

Principle: 

This experiment is purely an application of the Beer Lamberts’ Law which states that the concentration of the sample is directly proportional to the absorbance of light done by the sample. It is given by the following expression

A = E*C*l

The device UV spectrophotometer works on this principle and used to find  the concentration of the sample

Materials Required :

  • RNA sample
  • TE buffer
  • UV spectrophotometer

PROCEDURE:

Remove a 10 µl aliquot of total RNA and dilute with 990 µl of TE buffer (10  mM Tris, 1 mM EDTA, pH 7.0).

Restriction Enzyme Digestion

Read at A260 and A280 blanked against TE buffer and calculate the amount of RNA obtained. The RNA obtained may be determined by the formula

Total RNA (ug) = (A 260) (40 ug) (100) (0.05 ml) 

  • A260 is the absorbance of the solution at 260 nm
  •  1 OD of RNA equals to 40 ugs/ml/A 260
  •  100 is the dilution factor, and 0.05 ml is the total volume.
  •  Concentration = Total ug/50 ul = ug/µl or mg/ml

Results :

More.Exp…

Quantitative Analysis of RNA